Furin Plasmide Double Nickase (h): sc-400904-NIC

FURIN codifica la furina, una proproteina convertasi calcio‑dipendente localizzata prevalentemente nella rete trans‑Golgi e nei compartimenti endosomiali, dove cliva le proteine precursori in corrispondenza di motivi multibasici per generare fattori maturi bioattivi. Attraverso questa attività di processamento, la furina regola la maturazione lungo la via secretoria di ormoni, fattori di crescita, citochine, recettori ed enzimi che modificano la matrice extracellulare, influenzando vie legate alla segnalazione cellulare, all’adesione e al rimodellamento tissutale. La funzione di FURIN è integrata con il traffico vescicolare e la proteostasi, e un’alterata attività della furina è stata associata a una deregolazione della segnalazione infiammatoria, alla progressione oncogena e a meccanismi di ingresso o diffusione di patogeni nelle cellule ospiti. In quanto nodo centrale nel processamento delle proproteine, la furina è spesso studiata per chiarire come la maturazione proteolitica controlli il comportamento delle reti di segnalazione a valle in modelli cellulari umani.

Furin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FURIN nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FURIN. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FURIN. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FURIN interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.