FSD1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406328

Panoramica

FSD1 (fibronectin type III and SPRY domain containing 1) codifica una proteina citosolica che contiene domini SPRY e simili al tipo III della fibronectina, suggerendo un ruolo nelle interazioni proteina–proteina e nella regolazione di complessi di segnalazione. Collegamenti funzionali riportati collocano FSD1 nel controllo dell’organizzazione del citoscheletro e di processi associati ai microtubuli, con potenziali effetti sull’architettura cellulare, sul traffico intracellulare e sulle risposte allo stress. Espressione e alterazioni genomiche che coinvolgono FSD1 sono state osservate in dataset oncologici, supportandone l’uso come gene candidato per lo studio di meccanismi che influenzano proliferazione, migrazione e fitness cellulare. In quanto fattore relativamente poco caratterizzato, FSD1 è anche rilevante per studi di scoperta di vie di segnalazione che collegano proteine scaffold mediate da domini a output di segnalazione a valle.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FSD1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FSD1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FSD1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FSD1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FSD1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FSD1 per lo studio della segnalazione di FSD1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FSD1 critici per la funzione di FSD1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FSD1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FSD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FSD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FSD1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FSD1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FSD1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FSD1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FSD1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.