Flotillin-1 Plasmide Double Nickase (m): sc-420381-NIC

Flot1 codifica la flotillina-1, una proteina di impalcatura associata ai lipid raft, arricchita alla membrana plasmatica e nei compartimenti endosomiali, dove organizza microdomini di membrana. La flotillina-1 partecipa all’endocitosi indipendente dalla clatrina, al traffico vescicolare e alla trasduzione del segnale coordinando il clustering dei recettori e le interazioni con il citoscheletro, influenzando vie come EGFR/MAPK e PI3K/AKT. Nelle cellule di topo, Flot1 contribuisce alla segnalazione immunitaria, all’organizzazione della membrana in neuroni e cellule gliali e alla regolazione dell’adesione e della migrazione cellulare tramite lo smistamento di proteine dipendente dai raft. Alterazioni dell’abbondanza o della localizzazione della flotillina-1 sono state associate a fenotipi di traffico di membrana e di segnalazione deregolati, rilevanti per processi oncogeni, la neurobiologia e modelli di malattie infiammatorie.

Flotillin-1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Flot1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Flot1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Flot1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Flot1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.