FKBP8 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403075-ACT

FKBP8 (FK506 binding protein 8), noto anche come FKBP38, è un immunofiline associato ai mitocondri e al reticolo endoplasmatico (ER) che agisce come isomerasi peptidil-prolil cis–trans e come fattore di scaffold, coordinando il ripiegamento proteico e la segnalazione cellulare. Nelle cellule umane, FKBP8 modula l’apoptosi e l’omeostasi mitocondriale attraverso interazioni con le proteine della famiglia BCL2 e partecipa alle vie della proteostasi, incluse le reti di chaperoni e il turnover selettivo delle proteine. È stato collegato alla regolazione della segnalazione di mTOR e alle risposte allo stress cellulare che influenzano le decisioni di sopravvivenza in condizioni di stress metabolico o proteotossico. L’alterazione dell’espressione o della funzione di FKBP8 è stata studiata in contesti che coinvolgono un controllo anomalo dell’apoptosi, disfunzione mitocondriale e una segnalazione adattativa allo stress modificata, rilevanti per la biologia del cancro e la ricerca sulla neurodegenerazione.

FKBP8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FKBP8 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FKBP8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FKBP8 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FKBP8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FKBP8. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FKBP8 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FKBP8 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FKBP8 nelle cellule tumorali con espressione di FKBP8 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.