Filamin 3 Plasmide Double Nickase (h): sc-402897-NIC

FLNB codifica la filamina 3, una proteina di impalcatura legante l’actina che reticola l’F‑actina e organizza l’architettura del citoscheletro corticale per coordinare forma cellulare, polarità e stabilità meccanica. La filamina 3 sostiene l’adesione dipendente dalle integrine, il clustering dei recettori e la meccanotrasduzione accoppiando le proteine di membrana alla rete di actina e modulando la segnalazione delle GTPasi della famiglia Rho, influenzando così migrazione e rimodellamento tissutale. Nella biologia umana, l’alterazione della funzione della famiglia delle filamine è associata a dinamiche citoscheletriche anomale e a difetti dello sviluppo scheletrico, e varianti di FLNB sono correlate a fenotipi ereditari di displasia scheletrica. Queste proprietà rendono FLNB un bersaglio utile per studiare la segnalazione dipendente dalle forze, il dialogo tra citoscheletro e matrice extracellulare (ECM) e programmi morfogenetici regolati dallo sviluppo.

Filamin 3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FLNB nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FLNB. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FLNB. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FLNB interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.