FIH-1 Plasmide Double Nickase (m): sc-435640-NIC

Il gene murino **Hif1an** codifica il fattore inibitore di HIF-1 (FIH-1), un’idrossilasi dell’asparagina che, in modo dipendente dall’ossigeno, modifica HIF-1α e substrati correlati per limitare i programmi trascrizionali inducibili dall’ipossia. Idrossilando un’asparagina chiave nel dominio di transattivazione C-terminale di HIF-1α, FIH-1 riduce il reclutamento dei coattivatori e modula l’espressione di geni coinvolti in angiogenesi, metabolismo glicolitico, eritropoiesi e adattamento cellulare a basse concentrazioni di ossigeno. Oltre alla segnalazione HIF, FIH-1 è stato associato a una regolazione più ampia delle interazioni proteiche e delle risposte allo stress attraverso l’idrossilazione di proteine contenenti ripetizioni di anchirina. Una regolazione alterata della via HIF è rilevante per la biologia dell’ipossia tumorale, la segnalazione infiammatoria, il rimodellamento metabolico e le risposte tissutali legate all’ischemia, rendendo **Hif1an** un nodo utile per studi meccanicistici.

FIH-1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Hif1an nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Hif1an. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Hif1an. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Hif1an interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.