Plásmido Doble Nickase (m) FIH-1: sc-435640-NIC

Mouse Hif1an codifica el factor inhibidor de HIF-1 (FIH-1), una hidroxilasa de asparagina que, de manera dependiente del oxígeno, modifica HIF-1α y otros sustratos relacionados para restringir los programas transcripcionales inducibles por hipoxia. Al hidroxilar una asparagina clave en el dominio C-terminal de transactivación de HIF-1α, FIH-1 limita el reclutamiento de coactivadores y ajusta la expresión de genes implicados en la angiogénesis, el metabolismo glucolítico, la eritropoyesis y la adaptación celular a bajas concentraciones de oxígeno. Más allá de la señalización de HIF, FIH-1 se ha vinculado con una regulación más amplia de interacciones proteicas y respuestas al estrés mediante la hidroxilación de proteínas que contienen repeticiones de anquirina. La desregulación del control de la vía de HIF es relevante para la biología de la hipoxia tumoral, la señalización inflamatoria, la remodelación metabólica y las respuestas tisulares asociadas a la isquemia, lo que convierte a Hif1an en un nodo útil para estudios mecanísticos.

FIH-1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Hif1an en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Hif1an. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Hif1an. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Hif1an alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.