FGFR-4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420344

Panoramica

Fgfr4 codifica il recettore 4 del fattore di crescita dei fibroblasti (FGFR-4), una tirosin-chinasi recettoriale che lega ligandi FGF ed eparan solfato per avviare la segnalazione attraverso le vie MAPK/ERK, PI3K–AKT, PLCγ/PKC e STAT. Nelle cellule di topo, FGFR-4 regola proliferazione, differenziamento e sopravvivenza, con ulteriori ruoli nello sviluppo dei tessuti e nell’omeostasi metabolica. Un’alterazione della segnalazione di FGFR-4 è stata collegata, in diversi contesti di modelli tumorali, a risposte deregolate ai fattori di crescita, a cambiamenti nei programmi di migrazione e invasione cellulare e al rimodellamento del microambiente tumorale. Poiché FGFR-4 integra segnali extracellulari con output trascrizionali e del citoscheletro, è frequentemente studiato nelle reti di segnalazione recettoriale, nella regolazione a feedback e nel crosstalk di via con altre RTK.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FGFR-4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Fgfr4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Fgfr4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Fgfr4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FGFR-4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Fgfr4 per lo studio della segnalazione di FGFR-4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Fgfr4 critici per la funzione di FGFR-4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Fgfr4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FGFR-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal FGFR-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Fgfr4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FGFR-4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR FGFR-4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Fgfr4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Fgfr4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.