fetuin-A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401125

Panoramica

AHSG codifica la fetuina-A, una glicoproteina secreta prodotta prevalentemente dagli epatociti, che circola nel plasma e si associa a complessi minerali e lipoproteici. La fetuina-A modula l’omeostasi minerale extracellulare legando calcio e fosfato, influenzando la formazione di particelle calciproteiche e controllando la calcificazione ectopica; inoltre interagisce con la segnalazione del transforming growth factor-β/BMP contribuendo a definire i programmi di differenziamento osteogenico. In quanto proteina sierica multifunzionale, la fetuina-A è spesso studiata nel contesto dell’infiammazione metabolica, della regolazione della segnalazione insulinica e delle risposte dei macrofagi, collegando la biologia di AHSG a fenotipi cardiometabolici e legati alla calcificazione. Un’espressione alterata di AHSG o livelli modificati di fetuina-A sono stati associati a cambiamenti della funzione epatica e a processi sistemici rilevanti per la calcificazione aterosclerotica, lo squilibrio minerale nella malattia renale cronica e modelli di sindrome metabolica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO fetuin-A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene AHSG in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del AHSG insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto AHSG a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina fetuin-A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di AHSG per lo studio della segnalazione di fetuin-A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni AHSG critici per la funzione di fetuin-A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di AHSG per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal fetuin-A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal fetuin-A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus AHSG. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal fetuin-A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR fetuin-A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia AHSG per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio AHSG definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.