FBL3B Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405317-ACT

FBXL21 codifica una proteina contenente un dominio F-box e ripetizioni ricche in leucina che funge da componente di riconoscimento del substrato di un complesso ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo SCF (SKP1–CUL1–F-box), indirizzando bersagli specifici verso l’ubiquitinazione e la successiva degradazione da parte del proteasoma. Attraverso la degradazione proteica regolata, FBXL21 contribuisce al controllo della temporizzazione cellulare, delle risposte allo stress e della proteostasi, con particolare rilevanza per le reti regolatorie circadiane e trascrizionali. Modulando la stabilità degli effettori di via, FBXL21 può influenzare la dinamica della segnalazione, il coordinamento del ciclo cellulare e l’adattamento a stimoli ambientali. La deregolazione dei componenti del sistema ubiquitina–proteasoma, incluse le proteine F-box, è ampiamente associata a segnalazione oncogenica, neurobiologia e fenotipi infiammatori, rendendo FBXL21/FBL3B un nodo utile per indagini meccanicistiche.

FBL3B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FBXL21 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FBL3B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FBXL21 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FBXL21, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FBL3B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FBXL21 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FBL3B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FBL3B nelle cellule tumorali con espressione di FBXL21 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.