FBL10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403232-ACT

KDM2B (também conhecido como FBL10) codifica uma desmetilase de histonas contendo domínio JmjC que atua na regulação epigenética da transcrição por meio da remodelação da cromatina. A proteína está implicada na repressão gênica associada ao complexo Polycomb e na modulação de programas de ciclo celular e diferenciação via controle dos estados de metilação de histonas associados a promotores. Por meio dessas atividades, KDM2B/FBL10 influencia a manutenção da pluripotência/“stemness”, o comprometimento de linhagem e a senescência celular, ligando sua desregulação a sinais proliferativos alterados e a redes transcricionais aberrantes. Alterações na expressão ou função de KDM2B foram relatadas em diversos contextos relevantes para câncer e em fenótipos do desenvolvimento, tornando-o um nó útil para estudar o controle da expressão gênica dependente de cromatina.

FBL10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KDM2B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FBL10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KDM2B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KDM2B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FBL10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KDM2B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FBL10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FBL10 em células tumorais com expressão de KDM2B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.