Plasmide CRISPR/Cas9 KO FAM86A (m): sc-427731

Présentation

Eef2kmt code FAM86A, une méthyltransférase protéique dont il a été rapporté qu’elle modifie le facteur de traduction eEF2, ce qui l’associe au contrôle post-traductionnel de la fonction ribosomale et de l’élongation de la traduction. En régulant l’homéostasie des protéines associées à eEF2, FAM86A est en mesure d’influencer les programmes de croissance cellulaire, les réponses au stress et l’adaptation aux variations de l’état nutritionnel et énergétique. La perturbation des réseaux de contrôle de la traduction est largement pertinente pour des phénotypes prolifératifs et neurobiologiques, faisant d’Eef2kmt une cible utile pour des études mécanistiques de la protéostase et des interactions entre voies de signalisation dans des systèmes murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FAM86A (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Eef2kmt dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Eef2kmt, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Eef2kmt à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FAM86A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Eef2kmt pour l'étude de la signalisation de FAM86A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Eef2kmt essentiels à la fonction de FAM86A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Eef2kmt pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FAM86A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le FAM86A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Eef2kmt. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FAM86A plasmide HDR (m) et le FAM86A (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Eef2kmt pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Eef2kmt définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.