Evi-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404112

Panoramica

MECOM codifica il fattore di trascrizione Evi-1, una proteina a dita di zinco che si lega al DNA e regola programmi di espressione genica che controllano il mantenimento delle cellule staminali e progenitrici ematopoietiche, l’impegno di linea e la differenziazione cellulare. Evi-1 partecipa a reti trascrizionali ed epigenetiche che intersecano la segnalazione TGF-β/SMAD, le vie PI3K–AKT e il rimodellamento della cromatina, modulando proliferazione e sopravvivenza. Un’attività deregolata di MECOM/Evi-1 è frequentemente associata a neoplasie ematologiche, in cui un controllo trascrizionale alterato contribuisce a un’autorinnovamento aberrante e a una differenziazione compromessa. Oltre allo sviluppo del sangue, MECOM è stato implicato in processi di sviluppo e in circuiti trascrizionali oncogeni rilevanti per la trasformazione e per fenotipi metastatici in molteplici contesti tissutali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Evi-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MECOM in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MECOM insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MECOM a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Evi-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MECOM per lo studio della segnalazione di Evi-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MECOM critici per la funzione di Evi-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MECOM per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Evi-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Evi-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MECOM. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Evi-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Evi-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MECOM per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MECOM definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.