ErbB3/HER3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400146-ACT

ERBB3 codifica ErbB3/HER3, un membro della famiglia dei recettori tirosin-chinasici ERBB che funziona prevalentemente come co-recettore con attività chinasica compromessa. In seguito al legame con il ligando (ad es. le neureguline), ErbB3 forma eterodimeri con ERBB2/HER2 e con altri recettori ERBB per avviare la segnalazione attraverso PI3K–AKT, MAPK/ERK e vie correlate di crescita e sopravvivenza. La sua coda citoplasmatica contiene molteplici siti di docking per PI3K, consentendo un forte accoppiamento alla segnalazione a valle nonostante la limitata attività catalitica intrinseca. Un’espressione o una segnalazione di ERBB3 deregolate sono implicate nel ricollegamento delle reti oncogeniche, in fenotipi associati alla metastatizzazione e in meccanismi di resistenza in molteplici contesti tumorali.

ErbB3/HER3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ERBB3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ErbB3/HER3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ERBB3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ERBB3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ErbB3/HER3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ERBB3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ErbB3/HER3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ErbB3/HER3 nelle cellule tumorali con espressione di ERBB3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.