ERAP1 Plasmide Double Nickase (m): sc-429840-NIC

ERAP1 murino (Erap1) è una metallopeptidasi allo zinco residente nel reticolo endoplasmatico che rifinisce i precursori dei peptidi antigenici fino a lunghezze ottimali per il caricamento sulle molecole MHC di classe I, modellando l’immunopeptidoma e il riconoscimento da parte delle cellule T CD8+. Oltre al processamento degli antigeni, ERAP1 contribuisce al controllo di qualità delle proteine nel RE e può influenzare le risposte allo stress del RE attraverso i suoi ruoli nella gestione dei peptidi e nella proteostasi. Le variazioni dell’attività di ERAP1 sono state associate a disregolazione immunitaria e fenotipi infiammatori, rendendo Erap1 un bersaglio utile per studiare le vie di presentazione dell’antigene e le reti di segnalazione immunitaria. Nei modelli murini, l’alterazione di Erap1 supporta studi meccanicistici su processi rilevanti per autoimmunità e infezioni senza implicare esiti clinici.

ERAP1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Erap1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Erap1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Erap1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Erap1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.