EphB6 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-420202-LAC

Nel topo, Ephb6 codifica EphB6, un membro atipico della famiglia dei recettori tirosin-chinasici Eph con attività catalitica compromessa, che modula la comunicazione cellula-cellula dipendente da ephrin-B. Attraverso interazioni con altri recettori Eph e con ligandi ephrin, EphB6 contribuisce a una segnalazione dipendente dal contatto che influenza il rimodellamento del citoscheletro, l’adesione e la migrazione, con effetti a valle su vie quali la segnalazione delle GTPasi della famiglia Rho e la dinamica MAPK/ERK. Ephb6 viene studiato in contesti che includono l’attivazione delle cellule immunitarie e l’organizzazione epiteliale, in cui alterazioni della segnalazione Eph/ephrin possono rimodellare l’architettura tissutale e i microambienti infiammatori. Una disregolazione della segnalazione associata a EphB6 è stata collegata, in modelli sperimentali, a cambiamenti nel comportamento delle cellule tumorali e nel potenziale metastatico, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici di fenotipi cellulari associati a patologie.

Le particelle di attivazione lentivirale EphB6 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Ephb6 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale EphB6 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Ephb6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di EphB6. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Ephb6 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.