EphA5 Plasmide Double Nickase (h): sc-403104-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EphA5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il EphA5 Double Nickase Plasmid (h) e il EphA5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EPHA5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: EphA5 Antibody (8B10B1): sc-517242
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EphA5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403104-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EphA5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403104-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EPHA5 codifica EphA5, una tirosin-chinasi recettoriale del sistema di segnalazione ephrin-A che regola la comunicazione dipendente dal contatto tra cellule adiacenti. EphA5 modula la guida assonale, la formazione delle sinapsi e il raffinamento dei circuiti neuronali tramite una segnalazione bidirezionale che influenza il rimodellamento del citoscheletro, l’adesione e il traffico endocitico. Tra le vie a valle comunemente associate ai recettori Eph figurano le GTPasi della famiglia Rho, MAPK/ERK e nodi di segnalazione correlati a PI3K, che integrano segnali utili per la migrazione e la dinamica dei neuriti. Un’alterata regolazione di EPHA5 e lo squilibrio delle vie delle efrine sono stati associati a fenotipi di neurosviluppo e a ruoli dipendenti dal contesto in processi oncogeni quali l’invasione e la formazione di confini cellula–cellula, a supporto di studi meccanicistici sia in modelli neurali sia oncologici.
EphA5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EPHA5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EPHA5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EPHA5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EPHA5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.