ENX-1 Plasmide Double Nickase (m): sc-420259-NIC

L’Ezh2 murino codifica la metiltransferasi istonica ENX-1, nucleo catalitico del complesso repressivo Polycomb 2 (PRC2), che deposita H3K27me3 per imporre un silenziamento trascrizionale stabile durante lo sviluppo e la specificazione del destino cellulare. Attraverso la compattazione della cromatina mediata da PRC2, ENX-1 influenza i programmi di impegno di linea, il controllo del ciclo cellulare e le reti geniche associate alla differenziazione, integrandosi con regolatori epigenetici e fattori di trascrizione per mantenere stati di cromatina repressivi. Un’attività deregolata di EZH2/ENX-1 è collegata a paesaggi della cromatina alterati e a programmi di espressione genica aberranti osservati in diversi modelli di cancro e di biologia dello sviluppo, rendendolo un nodo chiave per lo studio del controllo epigenetico della proliferazione e dell’identità cellulare. Nei sistemi murini, la perturbazione di Ezh2 è ampiamente utilizzata per interrogare le vie dipendenti da Polycomb, inclusi il mantenimento delle cellule staminali, la differenziazione delle cellule immunitarie e la regolazione genica del neurosviluppo.

ENX-1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ezh2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ezh2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ezh2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ezh2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.