ENX-1 Double Nickase Plasmid (m): sc-420259-NIC

Das murine **Ezh2** kodiert die Histon-Methyltransferase **ENX-1**, den katalytischen Kern des **Polycomb Repressive Complex 2 (PRC2)**, der **H3K27me3** aufbringt, um während der Entwicklung und der Festlegung von Zellschicksalen eine stabile transkriptionelle Stilllegung durchzusetzen. Über die PRC2-vermittelte Chromatinkondensation beeinflusst ENX-1 Programme der Linienfestlegung, die Zellzykluskontrolle und differenzierungsassoziierte Gennetzwerke und integriert sich dabei mit epigenetischen Regulatoren und Transkriptionsfaktoren, um repressive Chromatinzustände aufrechtzuerhalten. Eine fehlregulierte EZH2/ENX-1-Aktivität ist mit veränderten Chromatinlandschaften und aberranten Genexpressionsprogrammen verknüpft, die in vielfältigen Krebs- und Entwicklungsbiologiemodellen beobachtet werden, und macht ENX-1 zu einem zentralen Knotenpunkt für die Untersuchung der epigenetischen Kontrolle von Proliferation und Identität. In Mausmodellen wird die Störung von **Ezh2** breit eingesetzt, um Polycomb-abhängige Signalwege zu analysieren, darunter die Aufrechterhaltung von Stammzellen, die Differenzierung von Immunzellen und die Genregulation während der Neuroentwicklung.

ENX-1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Ezh2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Ezh2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Ezh2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Ezh2-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.