EKLF/KLF1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402366

Panoramica

KLF1 (fattore Krüppel-like eritroide; EKLF) è un fattore di trascrizione a dita di zinco che funge da regolatore principale dell’impegno verso la linea eritroide e della maturazione terminale dei globuli rossi. Si lega ai motivi CACCC per controllare programmi di espressione genica specifici dell’eritroide, inclusi la regolazione dei geni della globina, la sintesi dell’emoglobina, il rimodellamento della membrana/del citoscheletro e il coordinamento delle vie associate all’enucleazione. KLF1 interagisce con la cromatina e con il macchinario trascrizionale per plasmare gli stati di differenziazione eritroide e l’adattamento metabolico durante l’eritropoiesi. Alterazioni genetiche o un’espressione deregolata di KLF1 sono associate a fenotipi ereditari dei globuli rossi e a difetti nello switching dell’emoglobina, a conferma della sua rilevanza negli studi sui meccanismi legati all’anemia e sulla biologia dello sviluppo eritroide.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EKLF/KLF1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KLF1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KLF1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KLF1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EKLF/KLF1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KLF1 per lo studio della segnalazione di EKLF/KLF1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KLF1 critici per la funzione di EKLF/KLF1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KLF1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EKLF/KLF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal EKLF/KLF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KLF1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EKLF/KLF1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR EKLF/KLF1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KLF1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KLF1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.