Plasmide Double Nickase (h) eIF4G: sc-400661-NIC

EIF4G1 code pour la protéine échafaudage humaine eIF4G, un composant central du complexe eIF4F qui coordonne l’initiation de la traduction des ARNm dépendante de la coiffe en reliant eIF4E, eIF4A, la PABP et la sous-unité ribosomique 40S via eIF3. En organisant l’assemblage du complexe de préinitiation et en favorisant le recrutement et le balayage (scanning) de l’ARNm, eIF4G intègre des signaux de croissance et de stress qui modulent la production traductionnelle, notamment des voies liées à la synthèse protéique régulée par mTOR et à la protéostasie cellulaire. La dérégulation de l’initiation de la traduction et l’altération de la fonction d’EIF4G1 ont été étudiées dans le contexte de phénotypes neurodégénératifs et, plus largement, de la biologie des réponses au stress, où des changements dans la traduction sélective de certains ARNm peuvent remodeler les programmes d’état cellulaire. En tant que nœud du contrôle traductionnel, EIF4G1 est fréquemment utilisé pour sonder les mécanismes reliant le métabolisme des ARN, l’homéostasie protéique et le remodelage du protéome dépendant des voies de signalisation.

eIF4G Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EIF4G1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EIF4G1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EIF4G1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EIF4G1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.