eIF4G Double Nickase Plasmid (h): sc-400661-NIC

EIF4G1 kodiert das humane Scaffold-Protein eIF4G, eine zentrale Komponente des eIF4F-Komplexes, der die cap-abhängige Initiation der mRNA-Translation koordiniert, indem er eIF4E, eIF4A, PABP und die 40S-Ribosomenuntereinheit über eIF3 miteinander verbindet. Durch die Organisation des Aufbaus des Präinitiationskomplexes sowie die Förderung der mRNA-Rekrutierung und des Scannings integriert eIF4G Wachstums- und Stresssignale, die die Translationsleistung modulieren, einschließlich Signalwege, die mit der mTOR-regulierten Proteinsynthese und der zellulären Proteostase verknüpft sind. Eine Fehlregulation der Translationsinitiation und eine veränderte EIF4G1-Funktion wurden im Kontext neurodegenerativer Phänotypen und der allgemeinen Stressantwort-Biologie untersucht, wobei Veränderungen in der selektiven mRNA-Translation Zellzustandsprogramme neu ausrichten können. Als Knotenpunkt der Translationskontrolle wird EIF4G1 häufig genutzt, um Mechanismen zu untersuchen, die RNA-Metabolismus, Protein-Homöostase und signalabhängige Umgestaltung des Proteoms miteinander verbinden.

eIF4G Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EIF4G1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EIF4G1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EIF4G1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EIF4G1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.