eIF4E3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407113

Panoramica

EIF4E3 codifica eIF4E3, un membro della famiglia dei fattori eucariotici di inizio della traduzione 4E che riconosce il cappuccio (cap) 5′ dell’mRNA e contribuisce alla regolazione dell’avvio della traduzione cap-dipendente. Rispetto alla forma canonica eIF4E1, eIF4E3 è spesso descritto come una proteina di legame al cap non canonica, in grado di influenzare programmi di traduzione selettivi per mRNA, modulando la proteostasi e l’espressione genica adattativa allo stress. Attraverso il suo impatto sul controllo traduzionale, eIF4E3 si integra con vie di crescita e di sensing dei nutrienti, come la segnalazione mTOR, e con reti più ampie del metabolismo dell’RNA. La deregolazione della traduzione cap-dipendente è una caratteristica ricorrente degli stati oncogenici e delle risposte allo stress, rendendo EIF4E3 un bersaglio utile per studi meccanicistici sul rimodellamento della traduzione in modelli cellulari rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO eIF4E3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene EIF4E3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del EIF4E3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto EIF4E3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina eIF4E3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di EIF4E3 per lo studio della segnalazione di eIF4E3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni EIF4E3 critici per la funzione di eIF4E3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di EIF4E3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal eIF4E3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal eIF4E3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus EIF4E3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal eIF4E3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR eIF4E3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia EIF4E3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio EIF4E3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.