Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
eIF4AIII Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-431393-ACT
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- eIF4AIII Plasmide di attivazione CRISPR (m) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- eIF4AIII CRISPR Activation Plasmid (m) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal eIF4AIII CRISPR Activation Plasmid (m) e dal eIF4AIII CRISPR Activation Plasmid (m2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di Eif4a3. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: eIF4AIII Antibody (B-2): sc-365549
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
eIF4AIII Plasmide di attivazione CRISPR (m) | sc-431393-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
eIF4AIII Plasmide di attivazione CRISPR (m2) | sc-431393-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
Il gene murino **Eif4a3** codifica **eIF4AIII**, un’elicasi dell’RNA della famiglia **DEAD-box** che funge da componente centrale del **complesso di giunzione degli esoni (exon junction complex, EJC)** e collega lo splicing del pre-mRNA ai successivi processi di sorveglianza dell’mRNA. eIF4AIII contribuisce a depositare e stabilizzare l’EJC sui trascritti sottoposti a splicing, supportando la **degradazione mediata da codoni di stop prematuri (nonsense-mediated mRNA decay, NMD)**, l’esportazione dell’mRNA e il controllo della traduzione. Attraverso queste vie di processamento dell’RNA, **Eif4a3** influenza programmi globali di espressione genica importanti per la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e le risposte allo stress. La disregolazione della funzione dell’EJC e della NMD è stata collegata a instabilità del trascrittoma rilevante per il neurosviluppo e per il cancro, rendendo **Eif4a3** un nodo utile per studi meccanicistici sul controllo qualità dell’RNA.
eIF4AIII Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Eif4a3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
eIF4AIII Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Eif4a3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Eif4a3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di eIF4AIII. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Eif4a3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da eIF4AIII nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via eIF4AIII nelle cellule tumorali con espressione di Eif4a3 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.