Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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eIF4AII Plasmide Double Nickase (h): sc-402758-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- eIF4AII Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il eIF4AII Double Nickase Plasmid (h) e il eIF4AII Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EIF4A2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: eIF4AII Antibody (H-5): sc-137148
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
eIF4AII Plasmide Double Nickase (h) | sc-402758-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eIF4AII Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402758-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF4A2 codifica eIF4AII, un’elicasi dell’RNA della famiglia DEAD-box che agisce all’interno del complesso di inizio della traduzione eIF4F per svolgere le regioni 5′ UTR strutturate e favorire il caricamento del ribosoma. Regolando la traduzione cap-dipendente, eIF4AII influenza la composizione del proteoma durante la crescita, le risposte allo stress e la progressione del ciclo cellulare, e interagisce con vie del metabolismo dell’RNA che controllano la stabilità dell’mRNA e l’efficienza di traduzione. Un controllo alterato dell’inizio della traduzione è associato a segnalazione deregolata e a squilibri della proteostasi, rendendo EIF4A2 un nodo utile per studiare programmi di traduzione oncogenici e vulnerabilità dipendenti dall’RNA. L’attività di eIF4AII è inoltre rilevante in contesti in cui la traduzione selettiva di trascritti strutturati modella la differenziazione e l’espressione genica adattativa allo stress.
eIF4AII Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EIF4A2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EIF4A2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EIF4A2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EIF4A2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.