eIF3γ CRISPR Activationプラスミド (h): sc-418339-ACT

EIF3Hは、真核生物翻訳開始因子3（eIF3）複合体の中核構成要素であるeIF3サブユニットγ（eIF3γ）をコードしています。eIF3γは、キャップ依存的な翻訳開始の過程で、40Sリボソーム小サブユニットのリクルート、mRNAの装填、開始コドンの認識を協調的に進めます。グローバルなタンパク質合成および特定転写産物の選択的翻訳を制御することで、eIF3γは細胞増殖、ストレス応答、タンパク質恒常性（プロテオスタシス）に影響を与え、翻訳出力を調整するmTORシグナルや統合ストレス応答（ISR）プログラムなどの経路とも交差します。eIF3複合体機能の変化は、増殖状態やストレス適応状態にある細胞で見られる翻訳制御の破綻と関連づけられており、翻訳リプログラミングが表現型に寄与する疾患関連モデルにおいてEIF3Hを検討する意義を支持します。

eIF3γ CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EIF3Hの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

eIF3γ CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EIF3H 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEIF3H転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性eIF3γの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEIF3H遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるeIF3γ依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEIF3H発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるeIF3γ経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。