eIF2S3 Double Nickase Plasmid (h): sc-406266-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das eIF2S3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- eIF2S3 Double-Nickase-Plasmid (h) und eIF2S3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EIF2S3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
eIF2S3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-406266-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eIF2S3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-406266-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF2S3 kodiert die Gamma-Untereinheit des eukaryotischen Translationsinitiationsfaktors 2 (eIF2γ), einen zentralen Bestandteil des eIF2-Ternärkomplexes, der während der cap-abhängigen Translationsinitiation die Initiator‑Met‑tRNAi zur 40S‑ribosomalen Untereinheit bringt. eIF2S3 ist an der Kontrolle der globalen Proteinsynthese und an selektiven Translationsprogrammen beteiligt, die mit der integrierten Stressantwort verknüpft sind, bei der die Phosphorylierung von eIF2α die Initiationsdynamik verändert und die mRNA‑Translation umprogrammiert. Über diese Signalwege beeinflusst EIF2S3 die Proteostase, den Fortschritt des Zellzyklus und die Stressanpassung in unterschiedlichen Zelltypen. Eine genetische Störung oder Fehlregulation von EIF2S3 ist mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und X‑chromosomal vererbten syndromalen Erkrankungen assoziiert und ist daher relevant für mechanistische Untersuchungen der Translationskontrolle in krankheitsrelevanten Modellen.
eIF2S3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EIF2S3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EIF2S3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EIF2S3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EIF2S3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.