eIF2Bδ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420143

Panoramica

Eif2b4 codifica la subunità δ di eIF2B, il fattore di scambio dei nucleotidi guaninici che rigenera eIF2-GDP in eIF2-GTP e, in tal modo, controlla l’inizio della traduzione. Modulando la disponibilità del complesso ternario, eIF2B integra segnali nutrizionali e di stress nell’ambito della risposta integrata allo stress e si interseca con la regolazione della sintesi proteica dipendente dalla fosforilazione di eIF2α. L’attività di eIF2B influenza la proteostasi, la crescita cellulare e programmi trascrizionali adattativi legati allo stress del RE e allo stress ossidativo. La disfunzione delle subunità di eIF2B è associata a vie coinvolte nelle leucodistrofie ipomielinizzanti, rendendo Eif2b4 un nodo rilevante per lo studio del controllo della traduzione sensibile allo stress nei sistemi neuronali e gliali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO eIF2Bδ (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Eif2b4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Eif2b4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Eif2b4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina eIF2Bδ.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Eif2b4 per lo studio della segnalazione di eIF2Bδ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Eif2b4 critici per la funzione di eIF2Bδ
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Eif2b4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal eIF2Bδ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal eIF2Bδ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Eif2b4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal eIF2Bδ Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR eIF2Bδ (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Eif2b4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Eif2b4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.