Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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EGFR Plasmide Double Nickase (m): sc-420131-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EGFR Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il EGFR Double Nickase Plasmid (m) e il EGFR Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Egfr. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: EGFR Antibody (A-10): sc-373746
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EGFR Plasmide Double Nickase (m) | sc-420131-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EGFR Plasmide Double Nickase (m2) | sc-420131-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’EGFR murino (Egfr) è una tirosin-chinasi recettoriale che lega i ligandi della famiglia del fattore di crescita epidermico, innescando la dimerizzazione del recettore, l’autofosforilazione e la segnalazione a valle. Una volta attivato, EGFR coinvolge le vie MAPK/ERK, PI3K–AKT, JAK/STAT e PLCγ per regolare proliferazione, sopravvivenza, differenziamento e omeostasi dei tessuti epiteliali. Nei modelli murini, la segnalazione dipendente da Egfr modella i programmi di sviluppo e le risposte alle ferite, e l’attività alterata di EGFR è spesso utilizzata per studiare la disregolazione della segnalazione dei fattori di crescita in oncologia e biologia dell’infiammazione. EGFR interagisce anche con il traffico endocitico e con regolatori di feedback che modulano ampiezza e durata del segnale, favorendo studi sul turnover del recettore e sulla dinamica della trasduzione del segnale.
EGFR Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Egfr nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Egfr. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Egfr. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Egfr interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.