EAR2 Plasmide Double Nickase (h): sc-404509-NIC

NR2F6 (EAR2) codifica un recettore nucleare orfano che funziona come fattore di trascrizione specifico per sequenza, collegando la segnalazione dei recettori nucleari indipendente dal ligando alla regolazione genica dipendente dalla cromatina. EAR2 modula programmi trascrizionali coinvolti nell’omeostasi immunitaria, nella segnalazione infiammatoria e nelle decisioni di destino cellulare, intersecando vie quali la JAK/STAT guidata dalle citochine e le reti geniche regolate da NF-κB, attraverso l’occupazione di promotori/enhancer e il reclutamento di coregolatori. Nelle cellule umane, un’attività alterata di NR2F6 è stata associata a risposte dei linfociti T dis-regolate e, più in generale, alla biologia dell’immuno-oncologia e delle malattie infiammatorie, rendendolo rilevante per lo studio della repressione/attivazione trascrizionale dipendente dal contesto. NR2F6 è inoltre utilizzato come nodo per analizzare il crosstalk tra recettori nucleari e identificare elementi regolatori che controllano l’espressione genica specifica di linea.

EAR2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NR2F6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NR2F6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NR2F6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NR2F6 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.