Dynamin I Plasmide Double Nickase (h): sc-401183-NIC

DNM1 codifica la dinamina I, una grande GTPasi arricchita nei neuroni che catalizza la scissione della membrana durante l’endocitosi mediata da clatrina e il riciclo delle vescicole sinaptiche. Attraverso un’oligomerizzazione dipendente dal GTP a livello del colletto delle vescicole in gemmazione, la dinamina I si coordina con adattatori endocitici e fattori che regolano l’actina per mantenere il traffico vescicolare, il rilascio di neurotrasmettitori e l’omeostasi di membrana. L’attività di DNM1 si integra in vie che governano la trasmissione sinaptica, il trasporto vescicolare e il rimodellamento della membrana, e le sue alterazioni sono associate a fenotipi neuroevolutivi ed epilettici. L’endocitosi deregolata e le dinamiche delle vescicole sinaptiche associate a DNM1 offrono un punto di accesso meccanicistico per studiare l’eccitabilità neuronale, la funzione di rete e la proteostasi dipendente dal traffico.

Dynamin I Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DNM1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DNM1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DNM1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DNM1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.