DR5 Plasmide Double Nickase (m): sc-423438-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DR5 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DR5 Double Nickase Plasmid (m) e il DR5 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Tnfrsf10b. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DR5 Antibody (7F4-F8-G11): sc-517559
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DR5 Plasmide Double Nickase (m) | sc-423438-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Tnfrsf10b** codifica il recettore di morte 5 (DR5), un membro della superfamiglia dei recettori del TNF che lega TRAIL e avvia l’apoptosi estrinseca attraverso la trimerizzazione del recettore, il reclutamento di FADD e l’attivazione della caspasi-8. La segnalazione mediata da DR5 può intersecarsi con l’amplificazione mitocondriale tramite BID e la caspasi-9, coinvolgendo al contempo anche le vie NF-κB e MAPK, che influenzano l’espressione di geni infiammatori e le risposte allo stress. La regolazione dell’espressione e del traffico intracellulare di DR5 modula la sensibilità alla segnalazione dei recettori di morte e contribuisce alle decisioni sul destino cellulare durante la sorveglianza immunitaria e l’omeostasi tissutale. Un’alterata attività della via di DR5 è spesso studiata nel contesto della biologia tumorale, della regolazione immunitaria e della resistenza agli stimoli apoptotici in modelli di malattia.
DR5 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Tnfrsf10b nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Tnfrsf10b. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Tnfrsf10b. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Tnfrsf10b interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.