DPF1 Plasmide Double Nickase (h): sc-409539-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DPF1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DPF1 Double Nickase Plasmid (h) e il DPF1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DPF1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DPF1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-409539-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DPF1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-409539-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DPF1 (double PHD fingers 1; noto anche come BAF45B) codifica una subunità associata alla cromatina dei complessi di rimodellamento SWI/SNF (BAF) che interpreta i segni istonici tramite i suoi domini a dito PHD per modulare l’accessibilità dei nucleosomi. Attraverso la regolazione dell’attività di enhancer e promotori, DPF1 contribuisce a programmi trascrizionali legati allo sviluppo neurale, alla specificazione di linea e all’espressione genica responsiva agli stimoli. L’alterazione della composizione dei complessi BAF e del rimodellamento della cromatina è ampiamente implicata in una differenziazione disregolata e in stati trascrizionali oncogenici, rendendo DPF1 un bersaglio utile per studiare il controllo epigenetico del destino cellulare e la trascrizione dipendente dal contesto. Nelle cellule umane, esperimenti incentrati su DPF1 permettono un’analisi meccanicistica delle vie accoppiate al rimodellamento della cromatina che plasmano reti di espressione genica rilevanti per lo sviluppo e per la riprogrammazione trascrizionale associata alle malattie.
DPF1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DPF1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DPF1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DPF1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DPF1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.