Doublecortin Plasmide Double Nickase (h): sc-400033-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Doublecortin/DCX Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Doublecortin/DCX Double Nickase Plasmid (h) e il Doublecortin/DCX Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DCX. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Doublecortin/DCX Antibody (E-6): sc-271390
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Doublecortin Plasmide Double Nickase (h) | sc-400033-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Doublecortin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400033-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DCX codifica per Doublecortin, una proteina associata ai microtubuli che si lega ai microtubuli e li stabilizza, regolando la migrazione neuronale, la crescita dei neuriti e la formazione degli strati corticali durante lo sviluppo cerebrale. Doublecortin coordina il rimodellamento del citoscheletro e l’accoppiamento tra centrosoma e nucleo, integrandosi con le dinamiche dei microtubuli che determinano la polarità cellulare e il movimento direzionato. L’alterazione di DCX compromette la migrazione radiale e il posizionamento dei neuroni, e varianti patogene sono associate a malformazioni del neurosviluppo, tra cui la lissencefalia legata al cromosoma X e l’eterotopia a banda sottocorticale. In quanto marcatore di DCX e regolatore funzionale nei neuroni immaturi, è ampiamente utilizzato per studiare i meccanismi della neurogenesi, della regolazione del citoscheletro e dell’assemblaggio dei circuiti durante lo sviluppo.
Doublecortin/DCX Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DCX nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DCX. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DCX. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DCX interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.