Plásmido Doble Nickase (h) Doublecortin: sc-400033-NIC

DCX codifica la doblecortina, una proteína asociada a los microtúbulos que se une a ellos y los estabiliza para regular la migración neuronal, el crecimiento de neuritas y la formación de las capas corticales durante el desarrollo cerebral. La doblecortina coordina la remodelación del citoesqueleto y el acoplamiento entre el centrosoma y el núcleo, integrándose con la dinámica de los microtúbulos que determina la polaridad celular y el movimiento dirigido. La alteración de DCX perturba la migración radial y el posicionamiento neuronal, y las variantes patogénicas se asocian a malformaciones del neurodesarrollo, como la lisencefalia ligada al cromosoma X y la heterotopia en banda subcortical. Como marcador de DCX y regulador funcional en neuronas inmaduras, se utiliza ampliamente para estudiar los mecanismos de la neurogénesis, la regulación del citoesqueleto y el ensamblaje de circuitos durante el desarrollo.

Doublecortin/DCX El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DCX en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DCX. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DCX. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DCX alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.