DOC1 Plasmide Double Nickase (h): sc-407358-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DOC1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DOC1 Double Nickase Plasmid (h) e il DOC1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FILIP1L. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DOC1 Antibody (D-2): sc-376472
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DOC1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-407358-NIC | 20 µg | $410.00 |
FILIP1L (DOC1) codifica la proteina filamin A interacting protein 1-like, un regolatore associato al citoscheletro coinvolto nel rimodellamento dell’actina, nel controllo della forma cellulare e nella segnalazione dipendente dall’adesione. DOC1 è stato collegato alla modulazione della migrazione e della proliferazione cellulare attraverso vie che coordinano le interazioni con la matrice extracellulare e le dinamiche guidate dalle GTPasi della famiglia Rho. Alterazioni dell’espressione di FILIP1L sono state riportate in molteplici contesti oncologici e vengono studiate in relazione a invasione, fenotipi associati alla metastasi e programmi trascrizionali responsivi allo stress. Queste caratteristiche rendono DOC1 un nodo utile per indagare come l’organizzazione del citoscheletro si integri con il controllo della crescita e della motilità nelle cellule umane.
DOC1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FILIP1L nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FILIP1L. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FILIP1L. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FILIP1L interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.