DMXL2 Plasmide Double Nickase (h): sc-417505-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DMXL2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DMXL2 Double Nickase Plasmid (h) e il DMXL2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DMXL2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DMXL2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-417505-NIC | 20 µg | $410.00 |
DMXL2 (proteina Dmx-like 2, nota anche come rabconnectina-3α) è una grande proteina scaffold contenente ripetizioni WD, implicata nell’organizzazione del traffico endomembranoso e nella regolazione dell’acidificazione delle vescicole attraverso interazioni con complessi associati alla V-ATPasi. È stata collegata alla modulazione della segnalazione Notch e dei processi secretori neuroendocrini, in linea con ruoli nella funzione delle sinapsi e delle vescicole a nucleo denso e, più in generale, nel controllo della comunicazione cellulare. Variazioni genetiche o un’espressione alterata di DMXL2 sono state associate a fenotipi di neurosviluppo e a disfunzioni dell’asse riproduttivo, a supporto della sua rilevanza per studi sui circuiti neuronali, sulla regolazione endocrina e sulle vie di segnalazione dipendenti dal traffico di membrana. In quanto gene umano, DMXL2 è frequentemente studiato in modelli di differenziamento neuronale, biologia delle cellule secernenti e crosstalk tra vie di segnalazione che coinvolgono la maturazione endosomale.
DMXL2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DMXL2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DMXL2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DMXL2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DMXL2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.