DIS3L2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405372-ACT

DIS3L2 umano codifica un’esorribonucleasi citoplasmatica 3′–5′ che partecipa alla sorveglianza e al turnover dell’RNA, con un ruolo di rilievo nella degradazione di substrati di RNA oligouridilati prodotti dall’aggiunta di code mediata da TUTasi. Attraverso l’eliminazione selettiva di pre-miRNA aberranti e di RNA strutturati, DIS3L2 influenza la biogenesi dei piccoli RNA, la regolazione genica post-trascrizionale e l’omeostasi cellulare in condizioni di stress. L’attività di DIS3L2 si interfaccia con vie che controllano proliferazione e differenziamento, modellando la stabilità dei trascritti e le reti di controllo qualità dell’RNA. Alterazioni della funzione di DIS3L2 sono state associate a fenotipi dello sviluppo e correlati ai tumori, rendendola un nodo utile per studiare come una degradazione dell’RNA deregolata contribuisca a programmi di espressione genica rilevanti per la malattia.

DIS3L2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DIS3L2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DIS3L2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DIS3L2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DIS3L2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DIS3L2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DIS3L2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DIS3L2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DIS3L2 nelle cellule tumorali con espressione di DIS3L2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.