DinB Plasmide Double Nickase (h): sc-405052-NIC

Il gene umano **POLK** codifica la **DNA polimerasi kappa (DinB)**, una polimerasi di sintesi per bypass translesione della famiglia Y che consente la replicazione attraverso voluminosi addotti del DNA e altre lesioni che altrimenti arresterebbero la polimerasi replicativa. POLK svolge un ruolo nella tolleranza al danno al DNA e nel mantenimento della progressione della forcella replicativa, interagendo con l’**antigene nucleare delle cellule in proliferazione (PCNA)** e partecipando a vie coordinate dalla segnalazione dello stress replicativo mediata da **ATR**. La sua attività di bypass delle lesioni influenza gli spettri mutazionali e la stabilità del genoma, collegando la disregolazione di POLK a risposte cellulari alterate allo stress genotossico e a una mutagenesi aberrante. POLK è quindi studiato nel contesto dell’equilibrio delle reti di riparazione del DNA, della biologia dello stress replicativo e dei meccanismi che modellano l’accumulo di mutazioni somatiche.

DinB Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus POLK nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di POLK. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di POLK. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con POLK interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.