DHRS3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-411259

Panoramica

DHRS3 (deidrogenasi/riduttasi 3) codifica una deidrogenasi/riduttasi a catena corta NADPH-dipendente che catalizza la riduzione del retinaldeide a retinolo, contribuendo a regolare l’omeostasi intracellulare dei retinoidi. Limitando la disponibilità di retinaldeide per l’ossidazione ad acido retinoico, DHRS3 modula i programmi di segnalazione dell’acido retinoico che influenzano la differenziazione, lo sviluppo embrionale, la biologia epiteliale e l’adattamento metabolico. L’espressione di DHRS3 risponde ai retinoidi e si integra con i processi di deposito del retinolo e con quelli legati allo stress ossidativo attraverso il controllo del flusso di aldeidi reattive. Un metabolismo dei retinoidi deregolato e un’attività alterata di DHRS3 sono stati associati ad anomalie dello sviluppo e a cambiamenti, correlati al cancro, degli stati di differenziazione, rendendolo rilevante per studi meccanicistici di fenotipi guidati dai retinoidi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DHRS3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DHRS3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DHRS3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DHRS3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DHRS3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DHRS3 per lo studio della segnalazione di DHRS3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DHRS3 critici per la funzione di DHRS3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DHRS3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DHRS3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DHRS3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DHRS3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DHRS3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DHRS3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DHRS3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DHRS3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.