desmoplakin I/II Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400818

Panoramica

DSP codifica desmoplachina I/II, un componente fondamentale della famiglia delle plachine dei desmosomi che ancora i filamenti intermedi ai complessi giunzionali basati sulle caderine, sostenendo così l’accoppiamento meccanico tra cellule adiacenti. Collegando gli assemblaggi desmogleina/desmocollina–plakoglobina/plakofilina alle reti di cheratina o desmina, la desmoplachina contribuisce a coordinare l’integrità dei tessuti epiteliale e cardiaco e regola il rimodellamento delle giunzioni durante la differenziazione e nelle risposte allo stress associate alle ferite. L’alterazione di DSP compromette l’organizzazione del citoscheletro, l’adesione cellula-cellula e la segnalazione mechano-responsiva, con una rilevanza consolidata per patologie ereditarie e acquisite che colpiscono epidermide e miocardio. Queste caratteristiche rendono DSP un nodo utile per studiare la stabilità delle giunzioni, il cross-talk del citoscheletro e le vie di rimodellamento indotte dallo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO desmoplakin I/II (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DSP in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DSP insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DSP a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina desmoplakin I/II.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DSP per lo studio della segnalazione di desmoplakin I/II, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DSP critici per la funzione di desmoplakin I/II
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DSP per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal desmoplakin I/II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal desmoplakin I/II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DSP. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal desmoplakin I/II Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR desmoplakin I/II (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DSP per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DSP definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.