desmoplakin I/II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400818

Übersicht

DSP kodiert Desmoplakin I/II, einen zentralen Bestandteil der Plakin-Familie in Desmosomen, der Intermediärfilamente an cadherinbasierte Zell-Zell-Kontaktkomplexe verankert und damit die mechanische Kopplung zwischen benachbarten Zellen unterstützt. Durch die Verbindung von Desmoglein-/Desmocollin–Plakoglobin-/Plakophilin-Komplexen mit Keratin- oder Desminnetzwerken trägt Desmoplakin zur Aufrechterhaltung der Integrität von Epithel- und Herzgewebe bei und reguliert den Umbau von Zellkontakten während der Differenzierung sowie bei stressassoziierten Wundreaktionen. Eine Störung von DSP beeinträchtigt die Zytoskelettorganisation, die Zell-Zell-Adhäsion und mechanosensitive Signalwege und ist nachweislich relevant für erbliche und erworbene Erkrankungen von Epidermis und Myokard. Diese Eigenschaften machen DSP zu einem geeigneten Angriffspunkt, um Kontaktstabilität, Zytoskelett-Crosstalk und stressinduzierten Remodeling-Mechanismen zu untersuchen.

Das desmoplakin I/II CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DSP-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DSP-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DSP nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die desmoplakin I/II-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DSP-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der desmoplakin I/II-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DSP-Exone abzielen, die für die desmoplakin I/II-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DSP-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom desmoplakin I/II CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom desmoplakin I/II CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DSP-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das desmoplakin I/II HDR-Plasmid (h) und desmoplakin I/II HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DSP-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DSP-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.