DENND4A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407301

Panoramica

DENND4A codifica una proteina contenente un dominio DENN che funziona da fattore di scambio dei nucleotidi della guanina (GEF) per le GTPasi Rab, supportando il traffico endosomiale e il riciclo di membrana. Attraverso la regolazione del trasporto vescicolare dipendente da Rab, DENND4A contribuisce allo smistamento del carico, al turnover dei recettori e all’organizzazione spaziale dei complessi di segnalazione che collegano le dinamiche di membrana alle vie a valle. La sua attività è associata a processi quali il sensing dei nutrienti, il rimodellamento del citoscheletro e la segnalazione compartimentalizzata sulle endomembrane, rendendola rilevante per studi sulla crescita cellulare e sull’adattamento allo stress. La disregolazione del traffico vescicolare e del controllo delle reti Rab è frequentemente associata a segnalazione oncogena, squilibri metabolici e fenotipi legati alla neurobiologia, collocando DENND4A come un nodo utile per analizzare i meccanismi di malattia associati al traffico intracellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DENND4A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DENND4A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DENND4A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DENND4A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DENND4A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DENND4A per lo studio della segnalazione di DENND4A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DENND4A critici per la funzione di DENND4A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DENND4A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DENND4A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DENND4A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DENND4A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DENND4A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DENND4A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DENND4A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DENND4A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.