DEK Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402862-ACT

DEK (umano) codifica una fosfoproteina conservata associata alla cromatina che si lega a DNA e RNA per regolare l’architettura della cromatina, il controllo trascrizionale e lo splicing dell’mRNA. Partecipa a processi legati alle risposte allo stress da replicazione del DNA, alla riparazione delle rotture a doppio filamento e al mantenimento della stabilità genomica, sostenendo la progressione del ciclo cellulare e i programmi di proliferazione. L’attività di DEK interseca la regolazione epigenetica e le reti trascrizionali infiammatorie, e un’espressione alterata è stata associata a contesti di segnalazione oncogenica e a una differenziazione deregolata. In quanto regolatore nucleare con ampi effetti sull’espressione genica, DEK è spesso studiato per i suoi ruoli nella biologia della trasformazione, in modelli di cellule ematopoietiche ed epiteliali e in stati trascrizionali adattativi allo stress.

DEK Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DEK senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DEK Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DEK nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DEK, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DEK. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DEK nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DEK nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DEK nelle cellule tumorali con espressione di DEK silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.