DDX60 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-408255-ACT

DDX60 (elicasi DEAD-box 60) è un’elicasi dell’RNA inducibile dall’interferone che svolge un ruolo nell’immunità innata antivirale rilevando e rimodellando l’RNA virale e promuovendo la segnalazione dell’interferone di tipo I. È stata implicata nelle vie dei recettori tipo RIG-I e nell’amplificazione dei programmi di espressione genica antivirale tramite la modulazione del metabolismo dell’RNA e delle reti di geni stimolati dall’interferone. Attraverso la sua attività elicasica, DDX60 può influenzare la stabilità e la traduzione dell’RNA, plasmando così le risposte cellulari all’infezione e agli stimoli infiammatori. Un’espressione deregolata di DDX60 e l’alterata attività della via dell’interferone sono state associate a patologie immuno-mediate e sono spesso studiate nel contesto delle interazioni tra cancro e sistema immunitario e degli stati infiammatori cronici.

DDX60 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DDX60 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DDX60 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DDX60 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DDX60, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DDX60. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DDX60 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DDX60 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DDX60 nelle cellule tumorali con espressione di DDX60 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.