DDX41 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402088-ACT

DDX41 codifica un’elicasi della famiglia DEAD-box che agisce come sensore di acidi nucleici e fattore regolatore nella segnalazione immunitaria innata. Partecipa al rilevamento del DNA citosolico e modula le risposte interferoniche a valle dipendenti da STING/TBK1, collegando il riconoscimento degli acidi nucleici a programmi trascrizionali che modellano l’infiammazione. DDX41 contribuisce anche al processamento dell’RNA e alla dinamica dei complessi ribonucleoproteici, sostenendo un ampio controllo dell’espressione genica e dell’omeostasi cellulare. Alterazioni genetiche o una disregolazione di DDX41 sono state associate alla biologia delle malattie ematologiche, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sulla segnalazione immunitaria, sul metabolismo dell’RNA e su vie associate ai tumori.

DDX41 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DDX41 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DDX41 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DDX41 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DDX41, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DDX41. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DDX41 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DDX41 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DDX41 nelle cellule tumorali con espressione di DDX41 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.