DDX32 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430371

Panoramica

Dhx32 codifica la proteina murina DDX32, una presunta elicasi dell’RNA ATP-dipendente della famiglia DEAD-box, implicata nel rimodellamento guidato dall’ATP delle strutture secondarie dell’RNA e dei complessi ribonucleoproteici. Le proteine di questa classe regolano comunemente processi fondamentali del metabolismo dell’RNA, tra cui lo splicing del pre-mRNA, il trasporto dell’RNA, la biogenesi dei ribosomi e la traduzione, collegando l’attività di DDX32 al controllo dei programmi di espressione genica. Alterazioni della funzione delle elicasi dell’RNA possono perturbare la regolazione del ciclo cellulare, la differenziazione e le risposte trascrizionali adattative allo stress, rendendo Dhx32 un locus utile per studiare le vie di processamento dell’RNA nello sviluppo e in fenotipi cellulari rilevanti per la malattia. Nei sistemi murini, l’analisi di Dhx32 supporta studi meccanicistici che collegano il metabolismo dell’RNA alle reti di segnalazione e alle relazioni genotipo–fenotipo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DDX32 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Dhx32 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Dhx32 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Dhx32 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DDX32.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Dhx32 per lo studio della segnalazione di DDX32, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Dhx32 critici per la funzione di DDX32
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Dhx32 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DDX32 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal DDX32 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Dhx32. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DDX32 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR DDX32 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Dhx32 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Dhx32 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.