DDX23 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407132

Descripción general

DDX23 codifica una helicasa de ARN tipo DEAD-box que actúa como componente central de la snRNP U5 dentro del espliceosoma, donde ayuda a remodelar complejos ARN–proteína para favorecer el empalme del pre-ARNm. Al regular el reconocimiento de los sitios de empalme y la dinámica del espliceosoma, DDX23 influye en la maduración de los transcritos, el equilibrio de isoformas y los programas posteriores de expresión génica vinculados a la progresión del ciclo celular y a las respuestas al estrés. La alteración de helicasas asociadas al espliceosoma puede modificar los patrones de empalme alternativo y la fidelidad del procesamiento del ARN, procesos que con frecuencia se han implicado en la reprogramación transcripcional oncogénica y la inestabilidad genómica. Como resultado, DDX23 se estudia habitualmente en el contexto del metabolismo del ARN, la proteostasis y las vías que acoplan el empalme a la señalización de daño en el ADN.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DDX23 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DDX23 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DDX23 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DDX23 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DDX23.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DDX23 para la investigación de la señalización de DDX23, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DDX23 críticos para la función de DDX23
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DDX23 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DDX23 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DDX23 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DDX23. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DDX23 (h) y el plásmido HDR DDX23 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DDX23 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DDX23 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.