DDR2 Plasmide Double Nickase (m): sc-421985-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DDR2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DDR2 Double Nickase Plasmid (m) e il DDR2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ddr2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DDR2 Antibody (3B11E4): sc-81707
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DDR2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-421985-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DDR2 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-421985-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Ddr2 codifica il recettore 2 del dominio discoidina (DDR2), una tirosina chinasi recettoriale attivata dal collagene che rileva il rimodellamento della matrice extracellulare e trasduce segnali che controllano adesione, migrazione e proliferazione cellulare. L’attivazione di DDR2 coinvolge vie a valle, tra cui la segnalazione MAPK/ERK e PI3K/AKT, e può modulare il turnover della matrice attraverso la regolazione delle metalloproteinasi durante lo sviluppo e la riparazione dei tessuti. In contesti stromali e mesenchimali, DDR2 contribuisce alle risposte a microambienti ricchi di collagene che influenzano processi legati alla fibrosi e le interazioni tumore–stroma. Alterazioni della segnalazione di DDR2 sono state associate a una disregolazione dell’omeostasi della matrice extracellulare e a un rimodellamento patologico in molteplici modelli di malattia, a supporto della sua rilevanza negli studi meccanicistici.
DDR2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ddr2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ddr2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ddr2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ddr2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.