DcR2 Plasmide Double Nickase (h): sc-403389-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DcR2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DcR2 Double Nickase Plasmid (h) e il DcR2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TNFRSF10D. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DcR2 Antibody (B-P30): sc-65310
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DcR2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403389-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DcR2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403389-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TNFRSF10D codifica il recettore esca 2 (DcR2), un membro della superfamiglia dei recettori del TNF che lega TRAIL (TNFSF10) ma è privo di un dominio di morte citoplasmatico funzionale, modulando così la segnalazione dell’apoptosi estrinseca alla superficie cellulare. Competendo con i recettori di morte come DR4 e DR5 per il legame al ligando, DcR2 può rimodellare l’attivazione a valle delle caspasi, gli output di segnalazione di NF-κB e i programmi di risposta allo stress che influenzano le decisioni sul destino cellulare. DcR2 è inoltre associato a fenotipi legati alla senescenza e a contesti di segnalazione infiammatoria in cui l’equilibrio della via di TRAIL influisce sull’omeostasi tissutale. Un’alterata espressione di TNFRSF10D è stata riportata in molteplici contesti rilevanti per diverse patologie, supportandone l’uso come nodo meccanicistico per studiare la resistenza all’apoptosi e le reti di segnalazione correlate al sistema immunitario.
DcR2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TNFRSF10D nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TNFRSF10D. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TNFRSF10D. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TNFRSF10D interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.