DAD1 Plasmide Double Nickase (h): sc-404172-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DAD1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DAD1 Double Nickase Plasmid (h) e il DAD1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DAD1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DAD1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404172-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DAD1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404172-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DAD1 (defender against apoptotic death 1) codifica una subunità conservata del complesso oligosaccariltransferasi (OST) nel reticolo endoplasmatico, supportando la glicosilazione N-linked durante la processazione co-traduzionale delle proteine. Accoppiando il trasferimento dei glicani ai polipeptidi nascenti, DAD1 influenza il controllo qualità del ripiegamento proteico, l’omeostasi del RE e la segnalazione dipendente dalla proteostasi. L’alterazione della funzione di DAD1 può rendere le cellule più sensibili all’apoptosi associata allo stress del RE e modificare la maturazione e il traffico di proteine secretorie e di membrana. Queste proprietà rendono DAD1 un nodo utile per studiare la biogenesi delle glicoproteine, le vie della risposta alle proteine mal ripiegate (UPR) e i meccanismi di proteostasi rilevanti per le malattie.
DAD1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DAD1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DAD1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DAD1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DAD1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.