D2DR/Dopamine D2 Receptor Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400235-ACT

DRD2 codifica per il recettore dopaminergico D2 (D2DR), un GPCR accoppiato a Gi/o che regola la neurotrasmissione inibendo l’adenilil ciclasi, riducendo la segnalazione cAMP/PKA e modulando l’attività dei canali ionici. La segnalazione del D2DR influenza la plasticità sinaptica e l’eccitabilità neuronale e si interfaccia con le vie MAPK/ERK e mediate da β-arrestina, che determinano desensibilizzazione e traffico del recettore. Nel sistema nervoso centrale, DRD2 è un nodo chiave nei circuiti dopaminergici che controllano motivazione, elaborazione della ricompensa e funzione motoria. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione di DRD2 sono state implicate nella biologia dei disturbi neuropsichiatrici e dei disturbi del movimento, supportandone l’uso come bersaglio meccanicistico nella mappatura di pathway e negli studi di genomica funzionale.

D2DR/Dopamine D2 Receptor Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DRD2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

D2DR/Dopamine D2 Receptor Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DRD2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DRD2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di D2DR/Dopamine D2 Receptor. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DRD2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da D2DR/Dopamine D2 Receptor nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via D2DR/Dopamine D2 Receptor nelle cellule tumorali con espressione di DRD2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.