Cytokeratin 6B Plasmide Double Nickase (h): sc-401651-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Cytokeratin 6B Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Cytokeratin 6B Double Nickase Plasmid (h) e il Cytokeratin 6B Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KRT6B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Cytokeratin 6B Plasmide Double Nickase (h) | sc-401651-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cytokeratin 6B Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401651-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KRT6B codifica la citocheratina 6B, una proteina dei filamenti intermedi di tipo II che forma eterodimeri con cheratine di tipo I per costruire la rete citoscheletrica degli epiteli stratificati. La citocheratina 6B contribuisce alla stabilità meccanica, alla differenziazione epiteliale e al rimodellamento indotto dallo stress, coordinandosi con i complessi di adesione desmosomali ed emidesmosomali per mantenere l’integrità del tessuto. La sua espressione è strettamente legata ai programmi di riparazione delle ferite e agli stati di attivazione dei cheratinociti, intrecciandosi con vie che regolano l’organizzazione del citoscheletro, la migrazione cellulare e la funzione di barriera. Un’espressione deregolata della cheratina 6B o alterazioni della rete di cheratine sono associate a iperproliferazione epiteliale e a fenotipi di genodermatosi, a supporto del suo impiego come marcatore e nodo funzionale nella biologia cutanea e nella ricerca sulla cheratinizzazione.
Cytokeratin 6B Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KRT6B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KRT6B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KRT6B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KRT6B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.