Cytokeratin 6A Plasmide Double Nickase (h): sc-401650-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Cytokeratin 6A Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Cytokeratin 6A Double Nickase Plasmid (h) e il Cytokeratin 6A Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KRT6A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Cytokeratin 6A Plasmide Double Nickase (h) | sc-401650-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cytokeratin 6A Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401650-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KRT6A codifica la citocheratina 6A, una proteina dei filamenti intermedi di tipo II che forma eterodimeri con cheratine di tipo I per costruire il citoscheletro delle cheratine negli epiteli stratificati. La citocheratina 6A contribuisce alla resilienza meccanica, regola la migrazione dei cheratinociti e il rimodellamento associato alle ferite, e interagisce con l’adesione desmosomiale e con le vie di segnalazione del citoscheletro che coordinano le risposte allo stress. La sua espressione viene indotta durante l’iperproliferazione e la riparazione tissutale, collegando KRT6A ai programmi di differenziamento epiteliale e al mantenimento della barriera. Una disregolazione di KRT6A è stata associata a disturbi della cheratinizzazione e a patologie epiteliali, rendendolo rilevante per studi sulla biologia dell’epidermide, sull’organizzazione del citoscheletro e sulle reti trascrizionali indotte dallo stress.
Cytokeratin 6A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KRT6A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KRT6A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KRT6A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KRT6A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.