Cytokeratin 14 Plasmide Double Nickase (h): sc-400362-NIC

KRT14 codifica la citocheratina 14, una proteina dei filamenti intermedi di tipo I che forma un eterodimero con la cheratina 5 per costituire la rete di cheratine basali negli epiteli stratificati. Questo sistema di filamenti garantisce resistenza meccanica, organizza i complessi di adesione dei desmosomi e degli emidesmosomi e influenza polarità, migrazione e risposte allo stress dei cheratinociti durante l'omeostasi epidermica e la riparazione delle ferite. KRT14 è un marcatore canonico dei cheratinociti basali ed è spesso utilizzato per studiare i programmi di differenziamento epiteliale e il rimodellamento del citoscheletro. Un'espressione alterata di KRT14 o varianti patogene sono associate a disturbi da fragilità epidermica e vengono impiegate come readout molecolari in modelli di disfunzione della barriera cutanea e di patobiologia dell'epitelio squamoso.

Cytokeratin 14 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KRT14 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KRT14. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KRT14. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KRT14 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.